W 1999 został dyrektorem generalnym stacji Nowyj kanał, którym kierował do 2005. W latach 2000–2001 pełnił funkcję społecznego doradcy premiera Wiktora Juszczenki. W 2004 był gospodarzem debaty prezydenckiej między Wiktorem Juszczenką i Wiktorem Janukowyczem. Zajmował się również produkcją filmów oraz seriali telewizyjnych. Od sierpnia 2008 do sierpnia 2019 jako dyrektor generalny kierował grupą medialną 1+1 media. W okresie jego zarządzania zespół medialny grupy zdobywał rocznie liczne nagrody, m.in. w 2018 uzyskał 43 nagrody z 73 krajowych nagród telewizyjnych „Tełetriumf”, a także europejskie nagrody „PromaxBDA Europe Awards”. W trakcie zarządzania grupą Ołeksandr Tkaczenko był zaliczany do najlepszych menedżerów branży medialnej. W międzyczasie przez kilka lat prowadził też na kanale 1+1 autorski program Tkaczenko.UA.
W wyborach parlamentarnych w tym samym roku z ramienia prezydenckiego ugrupowania Sługa Ludu uzyskał mandat posła do Rady Najwyższej IX kadencji. W czerwcu 2020 dołączył do rządu Denysa Szmyhala, obejmując w nim stanowisko ministra kultury i polityki