Jak pokazują badania, nie istnieje jeden idealny gen, który wykazuje stałą ekspresję we wszystkich tych warunkach, dlatego też niezbędne w wyborze genu referencyjnego jest wykonanie walidacji danego genu, co ma wpływ na dokładną analizę jego ekspresjihttps://bmcmolbiol.biomedcentral.com/articles/10.1186/1471-2199-6-4 Zhang X, Ding L, Sandford AJ, 2005. Selection of reference genes for gene expression studies in human neutrophils by real-time PCR. BMC Molecular Biology20056:4..
Obecnie najczęściej stosowane geny referencyjne to GAPDH (dehydrogenaza aldehydu 3- fosfoglicerynowego), ACT (β-aktyna), 18S rRNA i 28S rRNA, ALB (albumina), EF1A (elongation factor 1α) i innehttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3825189/ Kozera B, Rapacz M, 2013. Reference genes in real-time PCR. J Appl Genet. 2013;54(4):391–406.. W celu określenia, który gen odniesienia jest najlepszy do normalizacji transkryptu w konkretnym zbiorze próbek, opracowano algorytmy statystyczne takie jak RefFinder, NormqPCR, RefGenes, OLIVER, geNorm, BestKeeper i NormFinderhttps://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0193076 WANG J, Abbas M, Wen Y, Niu D, Sun Y, Li Y, 2018. Selection and validation of reference genes for quantitative gene expression analyses in black locust (Robinia pseudoacacia L.) using real-time quantitative PCR..
Przypisy
Kategoria:Geny