Margot Robbie jako Harleen Quinzel / Harley Quinn, była lekarz psychiatrii, która późnej stała się przestępczynią wcieloną do Legionu Samobójców. Mary Elizabeth Winstead jako Helena Bertinelli / Huntress, córka mafijnego gangstera Franco Bertinelliego, która postanowiła zwalczać przestępczość. Jurnee Smollett-Bell jako Dinah Lance / Black Canary. Rosie Perez jako Renee Montoya. Chris Messina jako Victor Zsasz, seryjny morderca, który zaznacza na swoim ciele liczbę swoich ofiar. Ella Jay Basco jako Cassandra Cain, młoda dziewczyna, której zagraża Black Mask. Ewan McGregor jako Roman Sionis / Black Mask, brutalny przestępca, który zagraża Cassandrze Cain.
Ponadto Charlene Amoia gra Marię Bertinelli, matkę Heleny i żonę Franco. W filmie występują również: Ali Wong, Steven Williams, Derek Wilson, Dana Lee, François Chau, Matthew Willig i Robert Catrini.