Klub sportowy US Mestrina został założony w miejscowości Mestre w październiku 1927 roku w wyniku fuzji czterech miejskich klubów AC Mestre, Mestre FBC (zał. w kwietniu 1927), Spes i Libertas. W sezonie 1927/28 zespół debiutował w rozgrywkach Terza Divisione Veneto (D4), zdobywając awans do Seconda Divisione. W 1931 zespół awansował do Prima Divisione (D3), która pozostała trzecim poziomem, po wprowadzeniu w 1929 Serie A i Serie B.
Po zakończeniu sezonu 1932/33 klub z powodu problemów finansowych zrezygnował z dalszych rozgrywek i został rozwiązany. W 1934 roku faszystowskie władze miasta przywracają klub pod nazwą AFC Mestre, który startował w Terza Divisione Veneto (D5). W 1935 awansował do Prima Divisione (D4), a w 1938 do Serie C. W 1944 wystąpił w wojennych mistrzostwach Veneto, zajmując piąte miejsce w grupie A.