Trawienie DNA Pseudomonas syringae enzymami restrykcyjnymi. Włóżenie pojedynczych kawałków DNA do plazmidu. Kawałki zostaną wstawione losowo, co pozwoli na wytworzenie różnych odmian rekombinowanego DNA. Transformację bakterii Escherichia coli zrekombinowanym plazmidem. Plazmid zostanie wchłonięty przez bakterie, czyniąc go częścią DNA organizmu. Zidentyfikowanie genu zarodkującego lód w licznych nowo opracowanych rekombinantów Escherichia coli. Rekombinowane Escherichia coli z genem zarodkującym lód będą miały fenotyp zarodkowania lodu, będą lodo-dodatnie. Po zidentyfikowaniu rekombinanta zarodkującego lód, amplifikuje się gen zarodkujący lód za pomocą technik, takich jak reakcje łańcuchowe polimerazy (PCR). Twórzenie zmutowanych klonów genu zarodkowania lodu poprzez wprowadzenie czynników mutagennych, takich jak promieniowanie UV, aby dezaktywować gen lodu, tworząc gen „lodo-ujemny”. Powtórzenie poprzednich kroków (wstawienie genu do plazmidu, przetransformowanie Escherichia coli, zidentyfikowanie rekombinantów) z nowo utworzonymi zmutowanymi klonami, aby zidentyfikować bakterie z genem lodo-ujemnym.
Źródło i licencja
Fragment artykułu Wikipedia — Bakterie lodo-ujemne · historia autorów.
Tekst: CC BY-SA 4.0. Wydzielono fragment z dłuższego artykułu.