Właściwości Jest to żółte ciało stałe, które średnio rozpuszcza się w zimnej wodzie, znacznie lepiej w ciepłej. Podobną rozpuszczalność wykazuje w pirydynie, jeszcze lepiej rozpuszcza się w takich rozpuszczalnikach jak etanol, gliceryna, glikol etylenowy, czy alkohol benzylowy, jednak znacznie słabiej w chloroformie, dioksanie czy ksylenie. Podczas ogrzewania powyżej 250 °C rozkłada się, jednak w roztworach wodnych może ulegać rozkładowi już przy ogrzewaniu powyżej 50 °C. Wykazuje właściwości fluorescencyjne. Maksimum absorpcji przypada na długości fal 370 nm i 432 nm, natomiast maksimum emisji na 550 nm.
Zastosowanie Auramina O, jak również inne sole auraminy, znalazła zastosowanie przede wszystkim jako barwnik w wielu działach przemysłu. Barwiono nią skórę, włókna jutowe i bawełniane, woski i oleje, była stosowana w taśmach barwiących, tuszach długopisów i kalkach. Duże znaczenie odgrywała w barwieniu papieru i fleksografii. Już w czasie I wojny światowej była stosowana jako składnik mieszanin pirotechnicznych służących do wytwarzania żółego, żółtozielonego bądź zielonego dymu.
Jako barwnik histologiczny stosowana jest w preparatyce do barwienia bakterii kwasoopornych, w tym w mieszaninie z rodaminą B jest wykorzystywana jako technika diagnostyczna do barwienia prątków gruźlicy ().