Ekologia i zachowanie Bothrops osbornei jest wężem naziemno-nadrzewnym, prowadzącym nocny tryb życia. Zamieszkuje stare lub umiarkowanie zniszczone wiecznie zielone lasy górskie, skraje lasów i pastwiska z rozproszonymi drzewami. Większość czasu spędzają zwinięte na poziomie gruntu lub siedząc na roślinności do 3,5 m nad ziemią. W ciągu dnia znajdowano osobniki odpoczywające na skałach, na roślinności lub chowające się w wysokiej trawie lub pod kłodami drzew. Żerują z zasadzki. Młode osobniki żywią się żabami (m.in. Pristimantis achatinus), dorosłe natomiast głównie gryzoniami. Zarówno młode, jak i dorosłe osobniki wabią ofiarę, poruszając jaskrawo kolorowymi ogonami jako przynętą.
Bothrops osbornei jest gatunkiem bardzo silnie jadowitym. Dawka śmiertelna LD50 2,6 mg/kg. W przypadku ukąszenia przez Bothrops osbornei ludzi, jad zwykle powoduje silny ból, obrzęk, krwawienie, gorączkę i martwicę.
Inkubacja jaj odbywa się w ciele samicy, która „rodzi” już wyklute młode, o długości wahającej się od 27,5 do 29,4 cm.