W 1899 roku założono Uniwersytet Techniczny w Brnie (k. k. Tschechischen technischen Hochschule Franz Josephs in Brünn).
W październiku 1905 roku w Brnie odbył się niemiecki kongres, zwany Volkstagiem, podczas którego doszło do starć między Czechami a Niemcami. Z inicjatywy Niemców wezwano żandarmerię, a na ulicach Brna interweniowało wojsko, w wyniku czego zginął jeden czeski robotnik. Po powstaniu Pierwszej Republiki Brno zostało zajęte przez Czechów 6 listopada 1918 roku. Pierwszy uniwersytet nowego państwa, Uniwersytet Weterynaryjny w Brnie, został założony 12 grudnia 1918 roku. W 1919 roku powstały Uniwersytet Masaryka i Uniwersytet Rolnictwa i Leśnictwa im. Mendla.
O przemysłowym obliczu współczesnego Brna przesądził przemysł zbrojeniowy i maszynowy, który rozwijał się wraz z fabryką broni Zbrojovka od uzyskania przez Czechosłowację niepodległości w roku 1918. Miasto miało silne związki kulturowe z Wiedniem, który leży o 50 km bliżej Brna niż Praga. W 1910 roku po niemiecku mówiło 66% mieszkańców Brna, dlatego po powstaniu Czechosłowacji przyłączono w 1919 roku do miasta okoliczne wsie, dzięki czemu statystycznie liczba Niemców spadła do 26%P. Pelčák, V. Šlapeta, Brno: architektura 1918-1939, Brno 2011, s.