W 2005 roku odcinki U.S. Route 66 przebiegające przez stany Illinois, Nowy Meksyk i Arizona zostały uznane za narodową drogę krajobrazową o nazwie Historic Route 66. Łączna długość drogi na tych odcinkach wynosi 2269,2 km i stanowi popularną atrakcję turystyczną.
Znaczenie drogi w kulturze Route 66 była inspiracją dla wielu twórców. Exodus osadników na zachód w latach 30. XX wieku opisał John Steinbeck w powieści Grona gniewu. W 1946 r. Bobby Troup napisał piosenkę Get Your Kicks on Route Sixty Six po swojej podróży tą trasą (swoje wersje tego standardu nagrały m.in. The Rolling Stones i Depeche Mode). Do legendy Route 66 nawiązuje też animowany film Auta z 2006 r. w reżyserii Johna Lassetera. Do filmów związanych z drogą należą również Urodzeni mordercy. Ostatnia z książek Carol O’Connell z cyklu powieści o detektyw Kathy Mallory, wydana w r. 2006 Find Me (brytyjski tytuł Shark Music), rozgrywa się niemal w całości na Route 66 i jej legenda odgrywa kluczową rolę w powieści. Logo Route 66 pojawia się również jako pionek w popularnej grze Monopoly: Świat. W latach 1960–1964 wyświetlany był również serial telewizyjny Route 66 o przygodach dwóch łowców przygód. Zaś w roku 1972 45-letni obywatel RPA John Ball przebiegł z Kalifornii do Chicago Route 66.