Stacją dowodzi komandor (od sezonu IV kapitan) Benjamin Sisko. Jego pierwszym oficerem jest Bajoranka Kira Nerys, której partyzancka przeszłość rzutuje znacznie na rozwój wypadków na stacji. Za porządek na DS9 odpowiada zmiennokształtny Odo, którego rasa doprowadza do wybuchu największej wojny w historii Zjednoczonej Federacji Planet. Rolę oficera naukowego pełni Jadzia Dax, przedstawicielka symbiontycznej rasy Trill. W ostatnim sezonie zamordowaną Jadzię zastępuje Ezri, która przejmując symbionta Dax, dysponuje całą wiedzą i wspomnieniami Jadzii. Lekarzem stacji jest Julian Bashir, człowiek poddany ulepszeniom genetycznym. Głównym inżynierem i dowódcą operacji jest Miles O’Brien, znany z Następnego pokolenia. W 4 sezonie serialu do załogi dołącza Worf, który stracił stanowisko szefa ochrony na Enterprise-D wraz ze zniszczeniem statku w pełnometrażowym filmie Star Trek: Pokolenia.
Na stacji przebywają również cywile, m.in. syn kapitana , chciwy barman - Ferengi Quark, tajemniczy Kardasjanin - krawiec oraz wielu innych.