Eksploatacja Elektrowozy serii 121 eksploatowane były wyłącznie w ruchu towarowym. W trakcie eksploatacji z powodów wypadków utracono dwie lokomotywy. W 1973 roku ze stanu CSD skreślono maszynę 121 036, która uległa wypadkowi. W 1993 roku 121 003 uległa uszkodzeniom w wypadku i została skreślona ze stanu CD. 12 grudnia 1997 roku lokomotywa 121 085 doznała poważnych uszkodzeń w wypadku kolejowym na stacji Všetaty po którym została skreślona ze stanu i zezłomowana w Ujściu na Łabą. W 1992 roku CSD sprzedała lokomotywę 121 066 prywatnej firmie TD Litoměřice. Była to jedyna sprzedaż lokomotywy prywatnemu podmiotowi w okresie istnienia CSD. W czerwcu 1998 roku maszyna ta wróciła jednak do CD w bardzo złym stanie technicznym, który nie kwalifikował ją do dalszej naprawy, co spowodowało, że stała się dawcą części, a następnie została zezłomowana w 2001 roku.
Obecnie są one wycofywane i na terenie Czech stacjonują w lokomotywowni Ústí nad Labem. Te najstarsze obecnie czeskie lokomotywy towarowe nie są już poddawane remontom, a eksploatowane są dziś głównie na bocznicach oraz jako zastępstwo za lokomotywy serii 122 i 123.