Biegi na 400 metrów podczas Igrzysk odbyły się w dniach 6 kwietnia (Eliminacje) oraz 7 kwietnia (finał). Do biegu zostało zgłoszonych 7 biegaczy, z czego 5 startowało także w biegu na 100 metrów.
Medaliści MedalZawodnikZłotoTom Burke SrebroHerbert Jamison BrązCharles Gmelin
Tło Dwoma najlepszymi biegaczami na 400 metrów w 1896 roku byli Amerykanin Tom Burke oraz Brytyjczyk Edgar Bredin. Zmierzyli się oni rok wcześniej w towarzyskich zawodach klubów New York AC - London AC, gdzie zwyciężył Amerykanin. Bredin oraz Burke byli współrekordzistami świata w biegu na 440 jardów (402,34 metra) z czasem 48,5. W 1896 roku Brytyjczyk przeszedł na zawodowstwo.
Eliminacje Eliminacje rozpoczęły się w dniu 6 kwietnia. Siedmiu zawodników zostało przydzielonych do dwóch biegów eliminacyjnych, z których po dwóch najlepszych awansowało do finału. Bieg odbywał się na dystansie nieco ponad jednego okrążenia (bieżnia stadionu Panateńskiego miała obwód około 330 metrów).
1 bieg eliminacyjny Pierwszy bieg eliminacyjny wygrał Amerykanin Herbert Jamison pokonując o około 13,5 jarda reprezentanta Cesarstwa Niemieckiegp Fritza Hofmanna.