W 1928 sprowadzono ikonostas z likwidowanej cerkwi w Grodnie.
W 1936 Królowy Most stał się oficjalnie filią prawosławnej parafii w Gródku. Wiosną 1935 Włodzimierz Wasilewicz, malarz z Supraśla, rozpoczął rozpisywanie fresków w budynku cerkwi w Królowym Moście. Prace ukończono przed 1939. W 1940 reaktywowano samodzielną parafię w Królowym Moście. Świątynię konsekrował 26 maja 1942 biskup Benedykt (Bobkowski).
3 lutego 1991 częściowo spłonął budynek plebanii. Dzięki ofiarności parafian plebanię w krótkim czasie wyremontowano.
Do parafii należą obecnie miejscowości: Królowy Most, Borki, Downiewo, Kołodno, Lipowy Most, Nowosiółki, Pieszczaniki, Podzałuki, Przechody, Radunin, Sofipol, Załuki i Zasady, z ogólną liczbą 310 wiernych.
Proboszczowie 1900 – ks. Prokop Łotocki 1900–1915 – ks. Włodzimierz Owczarewicz 1928–1939 – ks. Piotr Martyniuk (administrator) 1940–1949 – ks. Włodzimierz Żuk 1949–1950 – ks. Mikołaj Pasternacki 1950–1954 – ks. Antoni Tatiewski 1955–1969 – ks. Jan Bandałowski 1969–1971 – ks. Rafał Czystowski 1971–1982 – ks. Włodzimierz Misiejuk 1982–1983 – ks. Anatol Konach 1983–1992 – ks. Eugeniusz Michalczuk 1992–1999 – ks. Jan Pietruczuk 1999–2021 – ks. Eugeniusz Kosakowski od 2021 – ks.