Każdemu z klubów wolno zgłosić 55 zawodników do rozgrywek w sezonie, jednak w dniu meczu zgłoszonych może być tylko 48 zawodników.
Kluby w NFL działają na zasadzie franczyzy, którą otrzymują od komisarza i sekretarza ligi z certyfikacją na prowadzenie profesjonalnego klubu futbolu amerykańskiego w wyznaczonym mieście. Członkostwo lub udziały mogą zostać zbyte lub przeniesione na specjalnych zasadach. Przepisy ustalają także zasięg terytorialny dla drużyn (Home Territory), w którego ramach kluby mają wyłączne prawo do organizacji profesjonalnych meczów futbolu i mogą prowadzić działalność marketingową (Home Marketing Area).
Zasady przewidują możliwość dodania nowego członka do NFL, jednak decyzja ta musi zostać zaakceptowana przez 3/4 obecnych członków ligi. Nowy kandydat musi spełnić także określone wymogi formalne i finansowe.
Według rankingu „Forbesa” z 2025 roku drużyną o największej wartości w NFL jest zespół Dallas Cowboys (13 mld dolarów). Drugie miejsce zajęli Los Angeles Rams (10,5 mld), a trzecie New England Patriots (9 mld).