Wśród zbiorów Galerii Uffizi przeważają obrazy szkół włoskich i flamandzkich. W salach eksponowane są dzieła malarzy takich jak: Cimabue, Giotto, Duccio – trzy ołtarze Ukoronowanie Marii Simone Martini – Zwiastowanie Piero della Francesca – Portret Księcia Frederica da Montefeltro i Portret Battisty Sforzy (1472–1476) Lorenzo Monaco – Pokłon Trzech Króli, Ukoronowanie NMP i Narodzenie Fra Filippo Lippi – Madonna z Dzieciątkiem i dwoma aniołami Sandro Botticelli – Madonna, Narodziny Wenus (1481–1482), Wiosna (Primavera), Pokłon Trzech Króli Leonardo da Vinci – Zwiastowanie, Chrzest, szkic Pokłon Trzech Króli (na obrazach tych są duże fragmenty namalowane ręką Leonardo, ale nie ma obrazu, którego byłby jedynym twórcą) Michał Anioł – Święta Rodzina Rafael – Cudowna Madonna ze szczygłem, Papież Leon X z kardynałami Giulliem de’ Medicim i Luigim de’ Rossim Lucas Cranach – Adam (1528) Hugo van der Goes – Tryptyk Portinarich (1473–1475), Pokłon Trzech Króli (1476) Albrecht Dürer – Pokłon Trzech Króli, Portret ojca Giovanni Bellini – Święta alegoria Tycjan – Flora (ok. 1515), Rycerz maltański, Wenus z Urbino (1538), Portret papieża Pawła III z nepotami (1546) Rubens – Portret Izabelli Brandt Parmigianino – Madonna z długą szyją (1534–1540) Antoon van Dyck Rembrandt Caravaggio – Bachus (ok.