Pierwsza Runda Drużyny z League One oraz League Two rozpoczynają rozgrywki na tym etapie. Oprócz nich w grze uczestniczą zwycięzcy z ostatniej rundy eliminacyjnej. Losowanie odbyło się 25 października 2009, a rozgrywki rozpoczęto 6 listopada 2009.
Drużyna Paulton Rovers grająca na co dzień swoje mecze w Southern League Division One South and West (ósmy poziom ligowy w Anglii) była najniżej notowaną drużyną w tym etapie, jednakże przegrała wysoko z drużyną Norwich City F.C. pochodzącą z Football League One.
L.p.GospodarzewynikGościeWidzów 1 Gillingham 3:0 Southend United 4,605 2 Grimsby Town 0:2 Bath City 2,103 3 Gateshead 2:2 Brentford 1,150 powtórka Brentford 5:2 Gateshead 1,960 4 Chesterfield 1:3 AFC Bournemouth 3,277 5 AFC Telford United 1:3 Lincoln City 2,809 6 Stockport County 5:0 Tooting & Mitcham United 3,076 7 Burton Albion 3:2 Oxford City 2,207 8 Barrow 2:1 Eastleigh 1,655 9 Oldham Athletic 0:2 Leeds United 5,552 10 Cambridge United 4:0 Ilkeston Town 2,395 11 York City 3:2 Crewe Alexandra 3,070 12 Wycombe Wanderers 4:4 Brighton & Hove Albion 2,749 powtórka Brighton & Hove Albion 2:0 Wycombe Wanderers 3,383 13 Hereford United 2:0 Sutton United 1,713 14 Nuneaton Town 0:4 Exeter City 2,452 15 Bristol Rovers 2:3 Southampton 6,646 16 Carlisle United 2:2 Morecambe 4,181 powtórka Morecambe 0:1 Carlisle United 3,307 17