komisarz policji James Gordon (David Kaye) i reporter Jack Ryder (James Horan). Wśród powracających złoczyńców znaleźli się Człowiek-Zagadka (Wally Wingert), Victor Zsasz (Danny Jacobs), Bane (Fred Tatasciore) i Trujący Bluszcz (Tasia Valenza). Pojawia się również Harley Quinn, dubbingowana przez Tarę Strong, która zastąpiła Arleen Sorkin. Wśród debiutujących w drugiej części sojuszników Batmana znajdują się Kobieta-Kot (Grey DeLisle), Robin (Troy Baker) i Alfred Pennyworth (Martin Jarvis), który – podobnie jak Wyrocznia (Kimberly Brooks) – wspiera Batmana za pośrednictwem łączności radiowej. Wyłącznie w trybie wyzwań pojawia się również Nightwing.
Innymi postaciami debiutującymi w serii są naczelnik Arkham City Hugo Strange (Corey Burton), Dwie Twarze (Baker) i Pingwin (Nolan North). Stana Katić użyczyła głosu Talii al Ghūl, a Maurice LaMarche Panu Freeze’owi i Człowiekowi-Kalendarzowi. Wśród innych postaci znajdują się zombie Solomon Grundy (Tatasciore); zmiennokształtny (Rick D. Wasserman); przywódca Ligi Zabójców Rā’s al Ghūl; kontrolujący umysły Szalony Kapelusznik (Peter MacNicol); zabójca Deadshot (Chris Cox), który przeniknął do Arkham, żeby wyeliminować kilka znaczących celów; złoczyńca Hush (Conroy), tajemniczy Azrael (Khary Payton) i reporterka Vicki Vale (DeLisle). Gościnnie pojawiają się Czarna Maska (North), Zabójczy Kroko (Steven Blum) i Nora Fries, żona Freeze’a.
Świat gry