Rozgrywka thumb|250px|Konstantynopol w 1597 Sposób gry jest kontynuacją rozwiązań sprawdzonych w poprzednich częściach serii. Gracz kieruje asasynem w otwartym świecie, wykonując kolejne misje, które są powiązane fabularnie oraz dowolnie eksplorując wirtualny świat. W rozgrywce skupiono się głównie na walce, wspinaczce, freerunningu, skradaniu się, oraz pielęgnowaniu punktów taktycznych.
Ubisoft wprowadził do rozgrywki szereg zmian i ulepszeń. Znaczącą nowością jest modyfikacja ukrytego ostrza – specjalny hak, który znajdzie zastosowanie w walce oraz podczas przemieszczania się w mieście. Przy jego użyciu Ezio może korzystać z udogodnień jakie niesie ze sobą trawers linowy, potocznie zwany tyrolką, a podczas walki może przyciągać do siebie przeciwników. Hak znajdzie zastosowanie przy innych ruchach akrobatycznych w trakcie starć oraz przy wspinaczce, co ułatwia poruszanie się po mieście. Ulepszony zostanie także wzrok orła – zmysł orła pomoże graczom uzyskać przewagę taktyczną, dzięki umiejętnościom przewidywania ruchów ofiar. Nowością jest system tworzenia bomb.