Полімеразна ланцюгова реакція зі зворотною транскрипцією або ЗТ-ПЛР () — це лабораторний метод молекулярної біології, різновид ПЛР, що дає змогу використовувати як вихідний матеріал молекули РНК (найчастіше мРНК) для подальшої ампліфікації (збільшення кількості фрагментів) комплементарної ДНК (кДНК).
Основою методу є попередній синтез кДНК на матриці РНК за допомогою ферменту зворотної транскриптази (ревертази). Оскільки кДНК не розкладається рибонуклеазами, вона стабільніша, ніж РНК. Синтезована кДНК потім ампліфікується іншим ферментом — ДНК-полімеразою.
Формати проведення ПЛР зі зворотною транскрипцією проводиться у двоетапному (двокроковому) або одноетапному форматах. У двоетапній ЗТ-ПЛР кожен етап виконується послідовно за власних оптимальних умов: спочатку здійснюється синтез кДНК у буфері для зворотної транскрипції, після чого одну десяту частину отриманої суміші відбирають для проведення ПЛР. В одноетапній ЗТ-ПЛР зворотна транскрипція та ампліфікація відбуваються послідовно в одній пробірці за умов, оптимізованих для обох реакцій.
Практичне використання Метод застосовують у різних галузях, таких як медична діагностика, судова медицина та молекулярне клонування.
Примітки
Посилання Reverse Transcriptase PCR (RT-PCR) Theory — сайт освітньої платформи Labster