W 1935 roku 5 eskadra okrętów podwodnych średniego zasięgu, w której służyły jednostki typu Pisani, została przeniesiona do La Spezia, wchodząc w skład 1. Flotylli (wł. Gruppo) okrętów podwodnych. W 1936 roku okręty typu Pisani przebazowano na Leros, gdzie utworzyły 2 eskadrę 6. Flotylli okrętów podwodnych. Podczas wojny domowej w Hiszpanii „Marcantonio Colonna”, „Vettor Pisani” i „Des Geneys” odbyły misje specjalne trwające łącznie 41 dni. W 1938 roku okręty typu Pisani przebazowano do Mesyny, gdzie weszły w skład 31 eskadry 3. Flotylli okrętów podwodnych.
10 czerwca 1940 roku, w momencie ataku Włoch na Francję, okręt nadal znajdował się w składzie 31 eskadry okrętów podwodnych 3. Flotylli w Mesynie (wraz z siostrzanymi „Vettor Pisani”, „Giovanni Bausan” i „Des Geneys”). Dowództwo jednostki sprawował kpt. mar. (wł. tenente di vascello) Guido Gozzi. We wrześniu jednostka patrolowała wybrzeża Cyrenajki wraz z „”, „Goffredo Mameli” i „”. 19 września nieopodal Navarino „Marcantonio Colonna” uniknął torpedy wystrzelonej omyłkowo przez własny okręt podwodny „”.