Pierwszą rolą, dzięki której zyskała większą rozpoznawalność była postać Jamie w filmie Kelly Reichardt Kobiecy Świat (2016). Rola ta przyniosła Gladstone nagrodę Los Angeles Film Critics Association dla najlepszej aktorki drugoplanowej oraz nagrodę Boston Society of Film Critics dla najlepszej aktorki drugoplanowej. Otrzymała także nominację do nagrody Independent Spirit Awards dla najlepszej aktorki drugoplanowej oraz nagrodę Gotham (Gotham Independent Film Awards).
Gladstone zagrała rolę Kate Keller w sztuce The Miracle Worker wystawionej w 2014 roku przez Montana Repertory Theatre.
W 2017 roku Gladstone prowadziła serię Crash Course o produkcji filmowej na kanale YouTube. mały| Gladstone na Festiwalu Filmowym w Cannes w 2023 r. z Leonardo DiCaprio, Martinem Scorsese, Robertem De Niro. Gladstone w 2019 zagrała w filmie Kelly Reichardt - Pierwsza krowa. W 2022 za rolę w filmie Nieznany kraj, w reżyserii Morrisy Maltz, otrzymała nagrodę Gotham za wybitną pierwszoplanową kreację.