thumb|Łan owocujących czworolistów w runie leśnym Oddziaływania międzygatunkowe Roślina mikoryzowa, rzadko stwierdzane są okazy bez komponentu grzybowego. Ze względu na właściwości toksyczne czworolist w zasadzie nie jest zjadany przez zwierzęta. Wyjątkiem bywają organy generatywne spożywane przez ślimaki, owoce wraz z nasionami zjadane są także przez ssaki. Dziki powodować mogą straty w populacjach tego gatunku, gdy podczas buchtowania wykopują i przewracają rośliny.
Liście czworolistu są minowane przez larwy dwóch gatunków muchówek Parallelomma paridis i Parallelomma vittatum (kłośnicowate). Na pędach czworolistu obserwowano Puccinia sessilis (rdzawnikowce).
Systematyka i zmienność thumb|Roślina o pięciu liściach w okółku Gatunek należy do sekcji Paris, podgatunku Paris w obrębie rodzaju czworolist (Paris) z rodziny melantkowatych (Melanthiaceae). Cechuje się znaczną zmiennością fenotypową skutkującą różną liczbą liści w okółku, listków okwiatu, pręcików i szyjek słupka, przy czym nawet z jednej rośliny (z tego samego kłącza) wyrastać mogą pędy nadziemne różniące się liczbą ww. organów.