W drugiej połowie XIX w. i na początku XX w. Buffalo rozwijało się w bardzo szybkim tempie. W 1846 roku otwarto w mieście uniwersytet. W 1873 roku otwarto most kolejowy przez rzekę Niagara, łączący Buffalo z Fort Erie na kanadyjskim brzegu. W 1900 roku miało 352 tys., a w 1910 roku już 424 tys. mieszkańców. Do rozrostu miasta przyczynił się duży napływ imigrantów z Europy, w tym również z terenów Polski. W miarę postępu industrializacji w mieście zbudowano wiele fabryk i dużą hutę żelaza. W pierwszej połowie XX wieku rozwijał się przemysł maszynowy i lotniczy. Mieścił się tu zakład produkcyjny należący kolejno do wytwórni lotniczych Curtiss, Consolidated i Bell.
W czasie wystawy Pan American Exposition, w dniu 6 września 1901 roku, Leon Czolgosz dokonał zamachu, strzelając dwukrotnie do prezydenta Williama McKinleya. Prezydent zmarł od poniesionych ran 8 dni po zamachu, a Czolgosz, po krótkim procesie, został stracony na krześle elektrycznym w dniu 29 października 1901 roku.