W 1986 roku z Rubinem i inżynierem dźwięku Andym Wallace’em grupa przystąpiła do prac na trzecim albumem zatytułowanym Reign in Blood, który ukazał się 7 października tego samego roku nakładem DefJam Records w Stanach Zjednoczonych opatrzony okładką wykonaną przez Larry’ego Carrolla. W Europie natomiast płyta została wydana rok później. Na albumie ukazały się m.in. utwór traktujący o zbrodniarzu wojennym jakim był Josef Mengele „Angel of Death” będący przyczyną późniejszych oskarżeń zespołu o propagowanie ideologii narodowo socjalistycznej; „Raining Blood” czy „Postmortem”, które przez cały okres wieloletniej działalności grupy Slayer zawsze były wykonywane podczas koncertów. W ramach promocji albumu grupa zrealizowała pierwszy teledysk do utworu „Criminally Insane” w reżyserii Deana Karra oraz wystąpiła podczas trasy koncertowej Reign in Pain wraz z amerykańską grupą Overkill w Stanach Zjednoczonych oraz Malice w Europie. Promowany album cieszył się dużą popularnością sprzedając się w nakładzie 500 tys. egzemplarzy w Stanach Zjednoczonych, był to również pierwszy album Slayer który uzyskał status złotej płyty. Wkrótce potem z grupy odszedł perkusista Dave Lombardo skarżący się na niskie zarobki oraz sytuację rodzinną.