Początkowe etapy zostały tak zaprojektowane, aby gracze domyślili się, że grzybki są pożyteczne w rozgrywce: na poziomie 1-1 pierwszy z nich po uwolnieniu nie może zostać ominięty.
Użycie grzybów do zmiany rozmiaru postaci było inspirowane japońskimi legendami ludowymi, według których ludzie wędrowali po lasach, jedząc magiczne grzyby. Stąd świat gry uzyskał nazwę Mushroom Kingdom. Proces tworzenia gry miał na celu uproszczenie mechanizmów rozgrywki, aby producent zdążył z wydaniem jej przed zakończeniem sezonu zakupowego. Początkowo zakładano, że gra będzie zawierać typowo zręcznościowy etap, w którym Mario miałby skakać po chmurach i strzelać do wrogów. Idea ta jednak została zarzucona, gdyż twórcy woleli skupić się na poszerzeniu roli skoków w rozgrywce. Niemniej jednak w grze pozostały etapy związane z eksploracją nieba.
Na potrzeby Super Mario Bros. ścieżkę dźwiękową składającą się z sześciu utworów napisał Kōji Kondō. Zanim Kondō skomponował muzykę, otrzymał prototyp gry, aby zapoznać się ze specyfiką jej świata. Kondō napisał ścieżkę dźwiękową przy pomocy niewielkiego pianina, przy czym musiał zmienić tytułowy motyw – pierwotna wersja była mniej żywa i wolniejsza, co nie pasowało do wesołego i dynamicznego tonu gry.