Krzyżowcy byli wówczas zakonem laickim, obejmującym zarówno mężczyzn, jak i kobiety, rządzącym się regułą augustiańską (obowiązującą do dziś).
thumb|left|Płaszcz zakonnythumb|left|Habit zakonny
Znak i symbol zakonny W 1250 Agnieszka Czeska zwróciła się do papieża Innocentego IV z prośbą o przyznanie zakonnikom znaku odróżniającego ich od innych zakonów i bractw szpitalnych. Na mocy papieskiego polecenia biskup praski Mikołaj 17 czerwca 1252 do symbolu zakonu – czerwonego krzyżaCzerwony krzyż był początkowo trójpalczasty na zakończeniach, w XVII wieku przekształca się w krzyż kotwicowy, aby w XVIII wieku przyjąć ostatecznie formę krzyża maltańskiego – dodał czerwoną sześcioramienną gwiazdęGeneza tej części symbolu nie została do końca poznana. Przypuszcza się, że może mieć ona związek z herbem rodu magnackiego Sternbergów, na zamku których krzyżowcy mieli początkowo przebywać i z którego wywodził się pierwszy mistrz zakonu Albert. Poprzez symbol ten doszukują się badacze związku zgromadzenia z krucjatami i Ziemią Świętą. Gwiazda pod krzyżem zakonnym ma symbolizować Matkę Boską modlącą się pod krzyżem Jezusa. Nowy znak został przyjęty podczas uroczystości w kościele św. Pawła na Poryczu. Symbol zakonu został potwierdzony oficjalnie bullą z 20 czerwca 1256 przez papieża Aleksandra IV.