W trakcie zmian konformacyjnych wyindukowanych hydrolizą ATP, wnętrze „baryłki” (GroEL) zmienia swoje środowisko na coraz bardziej hydrofobowe, co stymuluje ukrywanie reszt hydrofilowych wewnątrz błędnie sfałdowanego białka, prowadząc do przyjęcia przez nie prawidłowej struktury. U bakterii kooperują z Hsp10 (GroES) – białkiem działającym jak przykrywka całej struktury. Wyróżnia się wśród Hsp 60 dwie podklasy I i II Hsp90 – najszerzej rozpowszechnione białka opiekuńcze, wspomagają funkcje Hsp70, działając w późniejszych etapach fałdowania. Posiadają wiele ko-chaperonów. W przeciwieństwie do innych klas pełnią też funkcję regulacyjną aktywując lub stabilizując pofałdowane białka. Ich działanie jest zależne od hydrolizy ATP TF (trigger factor) – ATP-niezależny, współpracuje z rybosomami bakteryjnymi, wspomagając wczesne etapy fałdowania.
Udział chaperonów w transporcie przez błony Białka pochodzenia jądrowego, przez błony mitochondriów czy plastydów przechodzą w formie liniowej (rozfałdowanej).